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藥典中核酸殘留限量規(guī)定
WHO和各國藥物注冊監(jiān)管機構(gòu)一般只允許生物制劑中存在100 pg/劑量以下的殘留DNA,特殊情況下不大于10ng/劑量。根據(jù)雜質(zhì)來源和純化工藝的不同,一般酵母、大腸桿菌表達的生物制品中DNA殘留量不超過10ng/劑量,Vero和MDCK細胞表達的疫苗等生物制品中DNA殘留量不超過100pg/劑量或10pg/劑量(根據(jù)宿主細胞和給藥方式的不同,限量要求不同)。
DENARASE® 全能核酸酶
DENARASE®全能核酸酶是一款通過微生物發(fā)酵生產(chǎn)的基因工程非限制性核酸內(nèi)切酶,其基因序列來自粘質(zhì)沙雷菌(Serratia marcescens),生產(chǎn)菌株是一種安全級別為S1級且不含內(nèi)毒素的革蘭氏陽性芽孢桿菌(Bacillus.sp.) ,大大降低了內(nèi)毒素污染風險。DENARASE®是c-LEcta GmbH公司在歐盟、美國、中國、印度、日本和韓國的注冊商標(https://denarase.com/)。其擁有的自主專利生產(chǎn)工藝,完全采用非動物性原料,不添加抗生素,符合歐盟GMP生產(chǎn)標準,通過ISO9001:2015質(zhì)量體系認證,核酸酶純度大于99%,酶活性高,且無蛋白酶活性,是生物制品生產(chǎn)工藝中常用全能核酸酶的典型代表。
DENARASE®全能核酸酶能夠降解所有形式的DNA和RNA,包括單鏈、雙鏈、線性、超螺旋和環(huán)狀DNA、RNA及基因組DNA,對核酸序列沒有特異性。在純化工藝中使用DENARASE®全能核酸酶,可有效降低細胞裂解液粘度,改善蛋白純化工藝,高效去除重組蛋白制品核酸污染,大幅降低終產(chǎn)品污染風險,滿足法規(guī)要求,在細胞治療、病毒載體疫苗等領域應用廣泛。DENARASE®全能核酸酶的DMF已經(jīng)提交,目前正處于審核階段。
核酸酶活性的影響因素分析
DENARASE®全能核酸酶在廣泛的條件下仍有很強的生物酶活性,跟大多數(shù)生物酶一樣,核酸酶的活性也會隨溫度、pH值、Mg2+、緩沖體系和底物濃度等因素的改變而變化。為了更好的發(fā)揮核酸酶的活性,幫助使用者更快的摸索出適宜的反應條件,小編為各位提供一組對核酸酶活性影響較大的關鍵參數(shù)指標供參考。(數(shù)據(jù)來源于廠家驗證指導文件)
溫度 |
適宜反應溫度為37℃ |
pH值 |
適宜pH值范圍是8.0-9.0之間 |
Mg2+ |
適宜Mg2+濃度范圍是1-2mM |
單價陽離子濃度 |
推薦Na+和K+的濃度在100mM以下 |
消泡乳化劑 |
4%的消泡乳化劑對核酸酶活性無明顯抑制作用 |
緩沖系統(tǒng) |
高濃度的緩沖體系會抑制核酸酶的活性 Tris鹽酸緩沖體系活性大于Tris磷酸鹽緩沖體系 |
底物濃度 |
DNA底物濃度不大于1mg/mL時活性較高 |
1 溫度
核酸酶適宜反應溫度為37℃。
2 pH值
不同緩沖體系結(jié)果顯示,適宜pH值范圍在8.0-9.0之間。
3 Mg2+
輔助因子Mg2+適宜濃度范圍是1-2mM,當增大Mg2+濃度時,酶活性會下降。
4 單價陽離子濃度
單價陽離子的存在會抑制核酸酶的活性,應控制Na+和K+的濃度在100mM以下。
5 消泡乳化劑
消泡乳化劑常被應用于工業(yè)生產(chǎn)的發(fā)酵液中,實驗結(jié)果顯示,4%的消泡乳化劑對核酸酶活性無明顯抑制作用。
6 緩沖系統(tǒng)
高濃度的緩沖體系會抑制核酸酶的活性,在Tris鹽酸緩沖體系中酶活性大于Tris磷酸鹽緩沖體系。隨著Tris磷酸鹽緩沖體系中磷酸鹽濃度的增加,酶活性降低,然而Mg2+離子濃度的增加會削弱其抑制作用。
DNA1 (standard):Sigma,D1626(salmon testes)
DNA2:Promega,D181A(herring sperm)
DNA3:GE Healthcare,27456501(200-6000 bps)
DNA4:Millipore,262015
7 底物種類及濃度
核酸酶對不同來源的DNA底物,降解的DNA片段長度不同,下圖為不同來源DNA底物,濃度在1mg/mL的結(jié)果。為了保持核酸酶的高活性,DNA底物濃度應不大于1mg/mL。
DENARASE®全能核酸酶產(chǎn)品信息
貨號 |
規(guī)格 |
酶活 |
詳情 |
20804-1M |
1 MU (1,000,000 Units) |
>250 U/μl |
生產(chǎn)和灌裝全部符合EU GMP標準;適用于生物制品生產(chǎn)或有GMP要求的應用中添加。 |
20804-5M |
5 MU (5,000,000 Units) |
>250 U/μl |
|
20804-100k |
100 kU (100,000 Units) |
>250 U/μl |
生產(chǎn)符合EU GMP標準,灌裝按照ISO 9001標準執(zhí)行;適用于生物制品研發(fā)或沒有GMP要求的應用中添加。 |
20804-500k |
500 kU (500,000 Units) |
>250 U/μl |
DENARASE® 全能核酸酶重要參數(shù)
c-LEcta GmbH公司為了確保DENARASE®全能核酸酶的穩(wěn)定和高質(zhì)量水平,每個批次試劑均滿足以下參數(shù)的內(nèi)部驗收標準。
酶活: >250 U/μL
純度: ≥99%
比活度:>6*105 U/mg
蛋白酶活性:無
內(nèi)毒素:<0.25EU/kU
總菌落數(shù):<250cfu/200μL
免費試用進行中
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