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什么是支原體?
支原體是一種大小介于細菌和病毒之間(最小直徑 0.2μm)并獨立生活的微生物,沒有細胞壁,表面由胞質(zhì)膜構(gòu)成,約有 1%的支原體可通過濾菌器。支原體污染細胞后,培養(yǎng)液可不發(fā)生混濁,多數(shù)情況下細胞病理變化輕微或不顯著。細微變化也可由于傳代、換液而緩解,因此易被忽視。但個別嚴重者,可致細胞增殖緩慢,甚至從培養(yǎng)器皿脫落。支原體污染細胞后會影響下游試驗結(jié)果。
為什么要重視細胞培養(yǎng)中的支原體污染?
1、污染率高:在細胞研究領(lǐng)域,支原體是臭名昭著的污染源,二十世紀九十年代的支原體污染率是四分之一,而目前有仍然有超過十分之一的基因表達研究(許多曾發(fā)表在頂尖雜志上),表現(xiàn)出支原體污染的跡象;
2、影響日趨嚴重:雖然支原體污染并不一定意味著研究結(jié)果無效,但它會影響數(shù)百個基因的表達,并與細胞競爭營養(yǎng)阻礙細胞的生長。在目前測試的一組受污染的數(shù)據(jù)中(淋巴瘤細胞),已經(jīng)鑒定出 61 個被支原體改變的基因,干擾了實驗結(jié)果。這無疑是對時間,資源,經(jīng)費很大的浪費;
3、難察覺:支原體污染完全是不留痕跡的,污染后的細胞生長速率一般并未發(fā)生顯著的影響,無法用肉眼識別,除非采用專門的支原體檢測方法檢測;
4、污染源多:“草率操作”、細胞系流通的交叉污染、操作人員自身都是很重要的污染源;
5、難去除:支原體體積小,無細胞壁,約有 1%的支原體可通過過濾器,且一般抗生素根本無法有效抑制或者去除支原體,另外,部分抗生素使用后會對細胞產(chǎn)生敏感效果,從而影響細胞的狀態(tài);
6、重視程度日益增加:學(xué)術(shù)雜志發(fā)表實驗結(jié)果需驗證支原體污染影響,在國際上,支原體污染檢測已經(jīng)日益成為細胞培養(yǎng)污染常規(guī)檢測之一,同時也是有效規(guī)避支原體污染的重要方法之一。
世界性難題?。。?!Nature 収布癿文獻表明細胞研究領(lǐng)域中存在嚴重的支原體污染問題
Ewen Callaway. Contamination hits cell work. Nature, 29 July 2014; doi:10.1038/511518a
如何保護細胞細胞不受支原體的污染?
西美杰代理的德國 PanReac Applichem 所提供 Myco 系列支原體清除產(chǎn)品可以直接整合到質(zhì)膜上破壞支原體的完整性,從而有效地清除支原體污染,而且沒有細胞毒性。另有支原體檢測與預(yù)防系列產(chǎn)品可以給細胞提供更多的安全保護。
一、AppliChem 支原體清除系列
對于普通細胞系,遭受污染以后可以通過重新復(fù)蘇,購買等途徑更換樣本,但是對于一些較難獲得的珍貴樣本,如干細胞,原代細胞,經(jīng)過特殊處理的,或訂購困難的細胞,一旦遭受支原體污染后,一定要馬上進行處理。AppliChem研發(fā)的支原體清除的 Myco 系列產(chǎn)品,可以直接整合到質(zhì)膜上破壞支原體的完整性,從而有效的清除支原體污染,并可以針對不同程度,不同細胞樣本進行針對性處理,處理過程簡單,對細胞不會造成任何副作用。
名稱 |
主要成分 |
適用樣本 |
使用斱法 |
Myco-3 (貨號 A5240) |
環(huán)丙沙星 |
貼壁細胞,可清除大多數(shù)支原體污染 |
100 倍稀釋加入培養(yǎng)基,每 2-3 天換液,連續(xù)處理14天 |
Myco-1 (貨號 A5222) |
泰妙菌素 |
貼壁細胞,配合能解決頑固型支原體或者使用 Myco-3 處理停用后又出現(xiàn)支原體污染的情況 |
100 倍稀釋加入培養(yǎng)基,與 Myco-2 配合使用。使用 Myco-1 處理 4 天后換 Myco-2 處理 3 天,如此重復(fù) 2-3 次即可 |
Myco-2 (貨號 A5233) |
二甲胺四環(huán)素 |
二、AppliChem 細胞污染預(yù)防系列
名稱 |
適用環(huán)境 |
預(yù)防微生物 |
使用斱法 |
Incubator-Clean (貨號 A5230) |
CO2 培養(yǎng)箱, 工作等臺等 |
支原體,真菌及芽孢、細菌、病毒(包拪 HIV,HBV 等) |
即用型,噴霧處理完全濕潤即可,無需轉(zhuǎn)移出細胞,建議每 2 周處理一次 |
Incuwater-Clean (貨號 A5219) |
C02 培養(yǎng)箱水盤 |
支原體,真菌及芽孢、細菌、病 毒(包拪 HIV,HBV 等) |
100 倍稀釋加入水盤滅菌水中,建議每 2-4 周更換滅菌水 |
Aquabator-Clean (貨號 A9390) |
水浴鍋 |
細菌,真菌 |
100 倍稀釋加入水浴鍋,建議每 1-2 周吐水浴鍋加入一次,每 4-6 周給水浴鍋更換一次水 |
三、Applichem 支原體檢測系列
傳統(tǒng)的支原體檢測方法包括支原體分離培養(yǎng)、支原體特異酶檢測、DNA 熒光染色檢測以及 PCR 檢測,除 PCR 檢測方法以外,其他檢測方法大多耗時長,要求檢測人員具有豐富的經(jīng)驗,并且無法獲得足夠的靈敏度和特異性,對于一些稀有的支原體亞種無法有效檢測。
AppliChem 設(shè)計的支原體檢測試劑盒系列產(chǎn)品均是基于 PCR 方法,根據(jù)支原體 16S rRNA 保守序列設(shè)計引物,經(jīng)過 PCR 反應(yīng)擴增其 16S rRNA 片段,后采用瓊脂糖電泳方法檢測 270bp 條帶。相對傳統(tǒng)方法而言,具有強大優(yōu)勢:
- 高靈敏度:敏感度高達 100~1000CFU/ml,僅需 要 0.5 - 1.0 ml 細胞上清樣本即可檢測;
- 檢測品種廣泛:可檢測常規(guī)品種,同時對于稀有 亞 種 也 能 同 效 檢 測 , 如 M. pneumoniae, Acholeplasma laidlawii, M. synoviae, M. pulmonis,M.bovis,幾乎覆蓋自然界 80 余個品種;
- 快速:操作時間只需 30 分鐘,全程 5 個小時內(nèi) 即可得到檢測結(jié)果;
- 可靠:試劑盒中包括有陽性對照 DNA,可保證 實驗結(jié)果的可重復(fù)性,減小因操作帶來的誤差;
- 安全性:無支原體培養(yǎng)過程,有效避免污染擴大。
產(chǎn)品型號
檢測方法
適用儀器
試劑盒組分
PCR
Mycoplasma Test Kit
(貨號 A3744)
普通 PCR-電泳檢測
普通 PCR 儀器
Reaction Mix Buffer Solution
Positive Template Control
qPCR Mycoplasma Test Kit
(貨號 A9019)
熒光定量 PCR
LightCycler®1.2, 1.5, 2.0, 480, Rotor-Gene? 3000, 6000,
ABI Prism® 7000, iCycler iQ®, iQ?5, Opticon 2, Chromo 4, MX300P®, MX4000®.
Primer/Probe/Nucleotide Mix(RED) Rehydration
Buffer(BLUE)
Positive Control DNA(GREEN) Internal Control
DNA(YELLOW) PCR Grade Water(WHITE)
西美杰是PanReac Applichem 中國總代理,為用戶提供完善的技術(shù)支持與售后服務(wù)。如對產(chǎn)品感興趣歡迎撥打西美杰客服熱線400-050-4006或登錄網(wǎng)站www.kd29.cn了解更多信息。