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植物凝膠是植物組織培養(yǎng)過程中用來凝固培養(yǎng)基的物質(zhì),其自身一般不具有營養(yǎng),作為固體支持物存在,一般在選用時考慮三個方面:1、使用方便;2、對培養(yǎng)植物不產(chǎn)生不利影響,不與培養(yǎng)基中其他組分例如抗生素發(fā)生反應(yīng);3、具有較好的透明度。
目前比較常用的植物凝膠主要包括:瓊脂(Agar)、結(jié)冷膠(Gellan Gum)、卡拉膠(Carrageenan)等。瓊脂是一種天然產(chǎn)物,主要來自紅藻科的兩個屬:石花菜屬(Gellidium)和江籬屬(Gracillaria)。石花菜屬本身小且生長緩慢,很難獲得,不經(jīng)濟,但其來源的瓊脂比江籬屬來源的具有更高的凝膠強度。由于瓊脂來自天然藻類,所以產(chǎn)品品質(zhì)容易受到原材料由于生長環(huán)境變化導(dǎo)致的影響,最終產(chǎn)生批間差異。不過西美杰代理的Phytotech Labs做為具有20多年生產(chǎn)經(jīng)驗的植物組培產(chǎn)品供應(yīng)商,在每批瓊脂出廠時,會進行清晰度、凝膠強度、植物生物生長以及產(chǎn)品其他理化性質(zhì)的評估,以確保產(chǎn)品的穩(wěn)定性??ɡz同樣來源于藻類,但比瓊脂有更好的透明度。結(jié)冷膠是新型的凝膠,來源于微生物發(fā)酵產(chǎn)物,批間差更加穩(wěn)定,而且具有用量小,透明度更高的有點。
西美杰代理的專業(yè)植物培養(yǎng)基品牌Phytotech Labs,可以為廣大植物客戶提供以下不同型號的植物凝膠:
A111 |
瓊脂(江蘺來源) |
~1150g/cm2 |
6-10g/L |
通用型瓊脂,價格更優(yōu)惠 |
A296 |
瓊脂(石花菜來源) |
~900 g/cm2 |
6-10g/L |
普通植物研究,微生物研究;石花菜生長緩慢很難獲得,不經(jīng)濟,所以價格較A111高 |
A175 |
高純度瓊脂 |
~1100 g/cm2 |
6-10g/L |
用于胚胎發(fā)生等關(guān)鍵研究的高純度瓊脂;可替代A111,但比A111更純凈 |
A133 |
瓊脂結(jié)冷膠混合物 |
TBD |
3.5-5 g/L |
用于工業(yè)化放大培養(yǎng) |
C257 |
卡拉膠 |
TBD |
6-10g/L |
用于原生質(zhì)體培養(yǎng) |
C2000 |
卡拉膠(高透明度) |
>800 g/cm2 |
6-10g/L |
用于原生質(zhì)體培養(yǎng) |
G434 |
結(jié)冷膠 |
>800 g/cm2 |
2-4 g/L |
高透明度 |
G3251 |
結(jié)冷膠 |
400-700 g/cm2 |
2-4 g/L |
G434升級款 |
使用注意事項:
l G434與氨基酸糖苷類抗生素(特別是卡那霉素和潮霉素B)一起使用對植物生長有影響。如遇此類情況,建議降低抗生素的使用濃度。
l 結(jié)冷膠的溶解要求比較特殊,一是溫度,結(jié)冷膠不溶于冷水,一定要是加入熱水?dāng)嚢枞芙?/span>;二是培養(yǎng)基中二價陽離子濃度是結(jié)冷膠凝固的關(guān)鍵,一般是Mg2+,和Ca2+這2種離子的總濃度在4-10mM適中,而且2種離子的濃度最好都不要低于1.5mM,低于或者過高都會影響凝膠效果,一般來說MS培養(yǎng)基中二價離子濃度是足夠的,1/2MS培養(yǎng)基用結(jié)冷膠也可以凝固的很好,目前確定不適合用結(jié)冷膠的培養(yǎng)基有DKW,SH,LS。三是pH值,結(jié)冷膠凝固最適合pH值為5.8,一般高溫滅菌影響不大,但不排除因為高壓條件變化導(dǎo)致pH值變化影響的凝膠效果。
l 植物凝膠尤其是瓊脂不凝固是與pH值有關(guān)系,pH過低導(dǎo)致的。出現(xiàn)此類情況是因為調(diào)節(jié)pH值的操作問題,很多客戶都先調(diào)節(jié)了pH值,然后再加入了植物凝膠,這個過程中pH值可能會降低到5.2,才會不凝固。解決辦法:加入瓊脂粉后調(diào)節(jié)pH值。