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病毒載體技術(shù)的研究不斷深入和發(fā)展,為遺傳物質(zhì)遞送提供了理想的工具,成為目前細胞治療與基因治療的主要遞送技術(shù)。然而,研究人員在細胞基因治療產(chǎn)品的純化工藝方面卻面臨著重大挑戰(zhàn)。目前的純化工藝大都來源于為單克隆抗體開發(fā)的解決方案,不適合用于病毒載體的純化。而基于傳統(tǒng)樹脂色譜法有明顯的局限性,如回收率低、耗時且成本高。
AstreAdept? 是一種新型的納米纖維材料,可有效解決粒徑大且脆弱的病毒顆粒純化面臨的耗時長、回收率低且雜質(zhì)含量高等問題。在這里,我們展示了該技術(shù)整合到離心管形式的Nereus LentiHERO?,并將其優(yōu)勢帶到實驗室規(guī)模的病毒載體純化中。
高瞬時結(jié)合表面積,更高效地處理慢病毒載體
AstreAdept?采用兩種不同的電紡材料(纖維素:575nm(+/- 50 nm)和非纖維素:200nm(+/- 50 nm))交織形成特性優(yōu)越的復合膜結(jié)構(gòu),可使產(chǎn)物溶液在高流速條件下快速擴散到高結(jié)合表面積(圖1),實現(xiàn)無阻礙的進入孔道。將該技術(shù)整合到層析純化基質(zhì)的LentiHEROTM將慢病毒純化帶入一個新的紀元。
圖1. AstreAdept? 新型的復合納米纖維材料解決脆弱大分子純化的瓶頸問題。
無阻礙液體流動系統(tǒng)優(yōu)點:
- 結(jié)合表面積更大
- 高回收率
- 高流速
Nereus LentiHERO? 用于慢病毒純化
圖2. Nereus LentiHERO? 僅需5步離心即可實現(xiàn)慢病毒快速純化
Nereus LentiHERO?顯著提高慢病毒回收率
高動態(tài)結(jié)合載量與高回收率,提升實驗室規(guī)模慢病毒生產(chǎn)效率。
圖3. 15%穿透時,每根離心柱的動態(tài)結(jié)合載量1.9E+10。 Nereus LentiHERO?離心柱以20 mv/min的速度上樣,流穿收集在10mL液體中,使用p24 ELISA分析,基于上樣的總VP,計算VP穿透百分比。
圖4. 有無血清培養(yǎng)體系慢病毒回收率:純化后樣品中慢病毒/病毒原液%。
血清(-) n=3,血清(+)n=2
? 高流速條件下不影響動態(tài)結(jié)合載量
? 保留時間 < 1s
? 無血清培養(yǎng)體系LV回收率>60%
Nereus LentiHEROTM宿主細胞蛋白殘留降低95%以上
降低HCP殘留在實驗室規(guī)模的樣品生產(chǎn)同樣重要,可顯著減少非必要的免疫反應。
用Nereus LentiHERO?純化的樣品
? 95% 宿主蛋白的去除
? 通過SDS-PAGE,洗脫液中檢測不到宿主蛋白
? 不論培養(yǎng)體系中有無血清,都能顯著去除宿主蛋白
圖5. Nereus LentiHEROTM可去除95% 以上宿主蛋白
Nereus LentiHEROTM對病毒結(jié)構(gòu)和感染效力影響很小
Nereus LentiHERO? 純化后的慢病毒顆粒保持了原有的功能、形態(tài)和大小
? 重要結(jié)構(gòu)蛋白完整,如編碼了衣殼、基質(zhì)與核衣殼的Gag蛋白
? 慢病毒顆粒大小和形態(tài)無改變
? 純化后的慢病毒感染活力未降低
圖6. 通過WB、電鏡和細胞感染實驗分別對比了Nereus LentiHERO? 純化前后慢病毒結(jié)構(gòu)蛋白的完整性、顆粒形狀大小與感染活力均未受到顯著影響。
Nereus LentiHEROTM兼具了產(chǎn)量、純度和時間效益
? 一臺臺式離心機即可實現(xiàn)高通量病毒純化
? 宿主細胞蛋白去除的同時樣品洗脫體積減?。饪s)
? 高純度、小體積樣品的進一步濃縮更節(jié)省時間
Nereus LentiHERO? 性能總結(jié)
? 一種新型基于納米纖維膜的AstreAdept? 技術(shù)為病毒載體純化工藝賦能
? 易于操作的設(shè)計,實現(xiàn)了功能性慢病毒顆粒的快速純化和高回收率
? 能顯著降低如宿主細胞蛋白(HCP)等雜質(zhì)的含量
? 可以同時處理多個樣品, 突破病毒載體開發(fā)樣品制備的瓶頸
圖7. LV 純化高得率,高通量,高純度,適用于小體積慢病毒樣本,操作時間短。
綜上所述,該技術(shù)提供了一種更具成本效益和時間效率的方案,提高研究人員對新型細胞和基因治療項目的開發(fā),助推新型生物治療藥物惠及廣大患者。
產(chǎn)品信息*:
品名 |
貨號 |
規(guī)格 |
Nereus LentiHEROTM |
NL100100 |
2 unit pack |
*采用相同技術(shù)適用于工藝放大的LentiHERO® 1與LentiHERO® 10預裝柱產(chǎn)品已上市,歡迎咨詢Astrea Bioseparations代理商北京西美杰科技有限公司。
Astrea Bioseparations于1987年孵化自劍橋大學,擁有超過30年層析介質(zhì)研發(fā)和生產(chǎn)經(jīng)驗,是世界級層析介質(zhì)產(chǎn)品與服務(wù)供應商。目前使用Astrea的產(chǎn)品已有超過21個生產(chǎn)工藝通過了FDA和EMA的批準。Astrea在希臘語中是“星際少女”的意思,象征著正義、純真、純潔和精確。使用Astrea Bioseparations這個名字體現(xiàn)了我們在工作中對純潔、精確和人性一如既往的關(guān)注。Astrea Bioseparations在全球擁有3個研發(fā)和生產(chǎn)基地,專注為生物大分子和CGT領(lǐng)域提供行業(yè)領(lǐng)先的層析介質(zhì)和技術(shù)服務(wù)。Astrea Bioseparations推出的基于納米纖維的新型層析技術(shù),解決了傳統(tǒng)生物分離工具載量低和工藝耗時問題,實現(xiàn)更快、更環(huán)保、更具成本效益的純化過程,完全符合當今生物治療創(chuàng)新的需求。
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